法一 OPA柱后衍生法 原理:样品用偏磷酸溶液溶解,经超声波振荡提取、离心、微孔滤膜过滤后,通过钠离子色谱柱分离,与邻苯二甲醛(OPA)衍生反应,用荧光检测器进行
检测,外标法定量。
仪器配置:高效
液相色谱仪,带有荧光检测器
柱后反应器
荧光衍生溶剂输液泵
超声波振荡器
pH 计:精度为0.01
离心机:转速≥5000 转/分钟
0.45 μm 微孔滤膜
天平:感量为1mg,0.1mg。
参考色谱条件:
色谱柱:钠离子氨基酸分析专用柱(250 mm×4.6 mm)或同等性能的色谱柱。
流动相:柠檬酸缓冲液(4.13)。
流 速:0.30 mL/min。
荧光衍生溶剂流速:0.30 mL/min。
柱温:55 ℃。
检测波长:激发波长:338 nm,发射波长:425 nm。
进样量:20 μL。
方法二 单磺酰氯柱前衍生法 原理:样品用水溶解,用亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质。取上清液用丹磺酰氯衍生反应,衍生物经C18反相色谱柱分离,用紫外检测器(波长254 nm)或荧光
检测器(激发波长330 nm,发射波长530 nm)检测,外标法定量。
仪器配置:高效
液相色谱仪,带紫外检测器或二极管阵列检测器或者
荧光检测器。
pH 计:精度为0.01。
涡旋混合器。
超声波振荡器。
离心机:转速≥5000 转/分钟
天平:感量1mg,0.1mg。
参考色谱条件:
色谱柱:C18 反相色谱柱(粒径5 μm,250 mm×4.6 mm)或同等性能色谱柱。
流动相:10 mmol/L 乙酸钠缓冲液(10.16)—乙腈(10.1)=70 30。
流速:1.00 mL/min。
柱温:室温。
检测波长:紫外检测器或二极管阵列检测器:254 nm;或荧光检测器:激发波长:330 nm;发射波长:530 nm。
进样量:20 μL。
LC-3000高效液相色谱仪能有效的完成以上
检测